人NT3、BDNF基因Tet-on可调控重组腺病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的: 分别构建含人神经营养素3(NT3)基因和脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组四环素可诱导的腺病毒载体, 并进行PCR和酶切鉴定.方法: 将NT3和BDNF基因依次分别亚克隆到pIND载体和pTRE-Shuttle2载体中, 构建重组载体pTRE-Shuttle2-NT3和pTRE-Shuttle2-BDNF.用PI-Sce I和I-Ceu I双酶切后将所获NT3及BDNF基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接, 构建成pAdeno-NT3及pAdeno-BDNF的重组腺病毒载体.以电穿孔转化E.coli后挑取克隆进行PCR及酶切鉴定.结果: 重组腺病毒载体的PCR鉴定表明, 在312 bp处出现特定的条带; 酶切鉴定证实, 得到约23 kb 的预期片段, 说明人NT3、 BDNF基因与腺病毒载体pAdeno-X已正确连接.结论: 成功地构建了含人NT3和BDNF基因的四环素可诱导重组腺病毒载体, 为进一步实现其在雪旺细胞中可调控的高效表达奠定了基础.

关键词：神经营养素3、脑源性神经营养因子、四环素、重组腺病毒载体

所属期刊栏目：20

分类号：R338(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金30271315

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：344-347