木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

摘要：

钙调蛋白(CaM)作为重要的抗逆信号转导蛋白,在调控木薯抗逆境和块根采后生理腐烂中起重要作用,为给快速检测木薯在不同生长环境中CaM蛋白的表达水平提供优良抗体,克隆木薯CaM基因并将目的基因插入原核表达载体,经Escherichia coli表达并纯化,用纯化的融合蛋白ACP-CaM免疫Balb/C小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选能产生抗CaM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA等方法对制备的单克隆抗体进行初步鉴定.Western blot分析结果显示原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达CaM,免疫小鼠后取效价高的2#小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,共获得7株效价均达到106以上、能稳定分泌抗CaM抗体的细胞株,这7株单抗与淀粉磷酸化酶、His、BSA均无交叉反应,4D5株与标签蛋白ACP有交叉反应,表明其余6株均为CaM特异性抗体;抗体亚型鉴定结果显示7株单抗均为IgG型抗体.

关键词：木薯、钙调蛋白、原核表达、单克隆抗体

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分类号：Q94-336(植物学)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项0315014;NSFC-CGIAR国际合作重点项目31361140366;现代农业产业技术体系专项资金CARS-12.Central Public-interest Scientific Institution Basal Research0315014;NSFC-CGIAR International Regional Cooperation and Exchange Programs31361140366;Chinese Cassava Agro-technology Research SystemCARS-12

在线出版日期：2017-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1317-1323