右美托咪定对软骨细胞内ADAMTS5介导基质降解及相关因子表达的影响

摘要：

目的 探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)干预对体外培养软骨细胞和相关因子表达的影响及可能分子机制.方法 体外培养C28/I2正常人软骨细胞,选取1μmol/L的DEX分别干预24、48 h.观察软骨细胞形态及细胞密度;用免疫荧光技术检测各组软骨细胞内人金属肽酶含血小板反应蛋白基元5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5,ADAMTS5)蛋白表达;用RT-PCR技术检测各组软骨细胞内软骨基质相关因子Adamts5、蛋白多糖(Acan)、多功能蛋白聚糖(Vcan)、弗林蛋白酶(Furin)、前蛋白转化酶枯草溶菌素6(Pcsk6)、Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅱ型胶原α1链(Col2a1)、Ⅹ型胶原α1链(Col10a1)和Y染色体性别决定基因相关高迁移率族蛋白盒9(Sox9)等的mRNA表达.应用慢病毒转染技术构建Adamts5基因敲除软骨细胞,并分别对Adamts5基因敲除软骨细胞给予DEX处理24、48 h,并用RT-PCR技术检测各组细胞内Acan、Vcan、Col1a1、Col2a1、Col10a1等基因mRNA的表达.结果 经1μmol/L DEX干预24、48 h后,软骨细胞形态和大小未发生明显变化,但细胞密度略有增加;免疫荧光染色显示,ADAMTS5蛋白表达呈先增高后降低的趋势;RT-PCR结果显示,培养24、48 h,Adamts5基因mRNA表达差异具有统计学意义(P=0.032),随干预时间延长,表达呈先增高后降低;Pcsk6基因的mRNA表达变化趋势与Adamts5相同,而Acan的表达趋势与Adamts5相反.敲除Adamts5的软骨细胞中,Adamts5 mRNA显著降低而Vcan mRNA表达增加;随后用DEX对其干预24、48 h,Acan和Vcan的表达均逐渐降低,但与正常软骨细胞相比差异无统计学意义.结论 DEX可能通过Pcsk6激活ADAMTS5酶原,从而促进软骨细胞内的蛋白聚糖降解.

关键词：右美托咪定、软骨细胞、ADAMTS5、基因敲除

所属期刊栏目：43

分类号：R336(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金资助项目

在线出版日期：2022-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：820-826