重组人细胞角蛋白9cDNA的原核表达及纯化

摘要：

目的 克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定.方法 从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达.表达的融合蛋白通过Ni2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合.结论 成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9.

关键词：原核表达系统、细胞角蛋白9、融合蛋白、细胞骨架

所属期刊栏目：38

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金资助项目81273211,81201373;陕西省社会发展科技攻关项目2016SF-238;西安交通大学第一附属医院基金资助项目No.2016QN-13 Supported by the National Natural Science Foundation of China81273211 and 81201373;the Scientific and Technological Project of Social Development Foundation of Shaanxi Province2016SF-238;Science Foundation of the First Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University2016QN-13

在线出版日期：2017-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：502-506