钠通道 SCN5a 突变体 R104W 的构建及验证

摘要：

目的：构建并验证 Brugada 综合征相关钠通道 SCN5a 基因 R104W 突变体。方法采用一步法 PCR 突变技术,以 pEGFP-SCN5a 为模板,体外定点诱变构建 pEGFP-SCN5a-R104W 突变体,进行基因测序,并用 Lipofectamine TM3000脂质体转染法转入 HEK293细胞,通过 Western blotting 和膜片钳记录检测蛋白质表达和电流加以验证。结果测序结果显示 SCN5a-R104W 突变体基因序列上第310 C>T,其他序列碱基与野生型相比未发生改变；West-ern blotting 结果显示 SCN5a-R104W 突变体蛋白表达量较野生型 SCN5a 降低；荧光显微镜下显示 SCN5a-R104W 突变体蛋白位于胞质内；SCN5a-R104W 突变体转染后膜片钳记录未能检测到钠电流,且 R104W 突变体对野生型通道有负显性抑制作用。结论成功构建并验证 SCN5a 基因 R104W 突变体。

关键词：钠通道、R104W 突变、Brugada 综合征、定点诱变

分类号：R541.7(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No.81170175 Supported by the National Natural Science Foundation of China 81170175

在线出版日期：2015-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：435-438,443