霜天蛾cDNA表达文库的构建和初步鉴定

摘要：

目的构建霜天蛾cDNA表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础.方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成ds cDNA,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的双链ds cDNA经过凝胶柱层析,收集大于400 bp的cDNA片段,加工后与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析.结果成功构建了一个含有5 ×105重组子的霜天蛾表达文库,重组率为67%,平均插入片段长度约为1.49 kb. 结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA克隆.

关键词：霜天蛾、cDNA表达文库、鉴定

所属期刊栏目：26

分类号：R593.1(全身性疾病)

资助基金：国家自然科学基金30271160

在线出版日期：2005-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：244-246,279