兔Oddi氏括约肌细胞BK 通道Alpha亚基在Pichia酵母中的高效表达、纯化和鉴定

摘要：

目的用巴斯德毕赤酵母系统表达兔Oddi氏括约肌(SO)细胞BK 通道α亚基,并进行纯化和鉴定.方法采用RT-PCR扩增编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,经测序正确将其克隆入酵母表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115.经MD平板筛选重组子、G418筛选鉴定后,甲醇诱导表达,镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化,进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果用RT-PCR扩增出约1 497 bp的兔SO细胞BK通道α亚基基因的cDNA.序列分析显示,扩增序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道α亚基的cDNA序列完全一致.SDS-PAGE显示本系统表达的α亚基融合蛋白Mr约为55 000,表达量约为55 mg/L,纯度为96%.Western blot检测证明,该α亚基融合蛋白可与兔BK 通道α亚基多克隆抗体特异性结合.结论克隆了编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,并在毕赤酵母中成功地表达了该蛋白,为进一步研究BK通道提供了物质基础.

关键词：Pichia酵母、BK 通道Alpha亚基、分泌表达

所属期刊栏目：26

分类号：R392.111

资助基金：国家自然科学基金30470787

在线出版日期：2005-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：212-215