葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠中TRAIL-R基因敲除对Th17细胞凋亡的影响

摘要：

目的:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体基因敲除(TRAIL-R-/-)对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响.方法:将C57BL/6品系小鼠分为4组:TRAIL-R-/-结肠炎组、TRAIL-R-/-对照组、野生型(WT)结肠炎组、WT对照组,每组各9只.结肠炎组饮用3.5％的DSS,对照组饮用清水.7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度.取外周血单个核细胞(PBMCs)和结肠黏膜固有层单个核细胞(LPMCs),采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测视黄酸相关孤儿受体(ROR-γt)和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平.采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率.通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性.结果:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎.TRAIL-R-/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05).TRAIL-R-/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05).与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL-R-/-结肠炎小鼠的结肠组织中Th17细胞的凋亡率(P<0.01)以及Caspase 3和Caspase 8的酶活性均显著降低(均P<0.01).结论:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠的结肠炎症较WT小鼠更为严重,原因可能是Th17细胞凋亡减少,其数目和活性增高所致.

关键词：受体、TNF相关凋亡诱导配体、结肠炎、Th17细胞、细胞凋亡

所属期刊栏目：50

分类号：R574.621(消化系及腹部疾病)

资助基金：浙江省自然科学基金资助项目;浙江省中医药科学研究基金资助项目;温州市科技局科研基金资助项目

在线出版日期：2021-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：947-954