鸦胆子素D对HPV16感染细胞株的作用及其可能机制

摘要：

目的：研究鸦胆子素D对高危型人类乳头瘤病毒（HPV）16感染细胞的增殖抑制作用、促凋亡作用及其可能机制。方法：以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株（Ect1/E6E7）作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用1、5、10、15、30μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h，用3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖活性改变；以1、5、10μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h后，Cell cycle staining solution检测细胞生长周期变化，Hoechst 33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡情况，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率。宫颈癌细胞株Caski含有完整的HPV16型E6、E7基因序列，以此作为阳性对照，通过实时荧光定量PCR技术检测两种细胞内HPV16 E6、E7基因mRNA的表达。结果：鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞具有明显的抑制体外增殖作用，MTT结果显示抑制作用呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48 h后，细胞生长周期停滞于G1期。流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48 h后，细胞凋亡率分别为（6.25±0.76）%（、20.21±1.32）%和（8.61±1.59）%，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Hochest33258细胞核染色法显示细胞出现凋亡形态学改变。Real-time PCR技术检测结果显示Ect1/E6E7中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平无明显下降，与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。而Caski中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平下降，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：鸦胆子素D能有效地抑制Ect1/E6E7细胞增殖，其机制可能是通过抑制HPV16 E6、E7 mRNA表达从而促进细胞凋亡。

关键词：人宫颈永生化细胞、鸦胆子素D、增殖、人乳头瘤病毒16

分类号：R711.74(妇产科学)

资助基金：浙江省中医药管理局科研项目2011ZB089。

在线出版日期：2015-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：89-94