β-N-乙酰葡萄糖苷内切酶Endo S异源表达及发酵优化

摘要：

Endo S(EC 3.2.1.96)是一种来源于化脓链球菌的β-N-乙酰葡萄糖苷内切酶,可以特异性水解免疫球蛋白G(IgG)可结晶区(Fc片段)N糖链.为实现其高效表达,本研究构建endo S重组表达大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)/pET28a-endo S,并验证表达蛋白糖苷水解活性,在摇瓶水平单因素优化蛋白质表达,考察了基础培养基种类、碳源、氮源、无机盐、培养基初始pH、发酵温度和时间等因素对产酶的影响,确定最优发酵培养基组成为(g/L):酵母粉10.0,甘油4.0,牛肉浸膏25.4,NaCl 5.0,pH 8.0,最优培养条件为:20℃诱导表达24 h,蛋白表达量为225 mg/L发酵液,是优化前的4.5倍,同时也是目前报道最高表达量的5.6倍.

关键词：β-N-乙酰葡萄糖苷内切酶endo S、重组大肠杆菌、异源表达、发酵优化

所属期刊栏目：39

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目;江苏省特聘教授项目2014;江苏省“六大人才高峰”项目

在线出版日期：2020-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：43-50