Bacillus stearothermophilus麦芽糖淀粉酶在Bacillus subtilis中的重组表达及发酵优化

摘要：

为了实现Bacillus stearothermophilus嗜热脂肪芽孢杆菌来源的麦芽糖淀粉酶基因amyM(EC 3.2.1.133)在枯草芽孢杆菌中的重组表达,以opt-amyM/T质粒为模板进行PCR扩增得到目的基因,与表达载体pHY300PLK进行重组连接后转入宿主菌Bacillus subtilis CCTCC M2016536中进行表达.在TB培养基中发酵培养48 h,麦芽糖淀粉酶酶活达到250.7 U/mL.继续对重组菌氮源种类及复配、氮源质量浓度、碳源质量浓度等摇瓶发酵条件进行优化,确定其最佳产酶条件为:复合氮源为酵母浸膏25 g/L和大豆蛋白胨5 g/L、葡萄糖5g/L、培养基初始pH 6.5、最适培养温度41℃;在此条件下麦芽糖淀粉酶酶活可达396.7 U/mL,是优化前的1.6倍.在此基础上进一步对麦芽糖淀粉酶进行酶学性质进行测定:麦芽糖淀粉酶最适温度为60 ℃,最适pH为5.5,半衰期为325 h,Km为0.95 g/L,比活为2 646 U/mg.

关键词：麦芽糖淀粉酶、枯草芽孢杆菌、酶学性质、发酵优化

所属期刊栏目：39

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家杰出青年科学基金项目;国家自然科学基金项目;江苏高校优秀科技创新团队项目

在线出版日期：2020-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1-9