壳聚糖酶的基因克隆表达及酶学性质研究

摘要：

作者从NCBI数据库中挖掘到来源于Butyrivibrio sp.MC2013的壳聚糖酶基因,命名为BUT,该壳聚糖酶基因大小为903 bp,编码301个氨基酸.通过NCBI数据库和进化树比对发现,该壳聚糖酶(BUT)属糖苷水解酶46家族(后简称GH-46),与其它壳聚糖酶相似度为59％,是一种新型的壳聚糖酶.序列经密码子优化后进行全基因序列合成,与表达载体pET21a(+)连接构建重组质粒pET-21a-BUT,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达宿主,进行诱导表达.所得重组壳聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,SDS-PAGE确定其蛋白分子量为35 kDa,DNS法测定其酶活为146.0 U/mg.对BUT酶的酶学性质进行探究,结果表明BUT酶最适温度和pH分别为45℃、8.0,在中性偏碱性条件下稳定性较强.Mn2+对其酶活力具有促进作用,SDS、Fe3+、Cu2+、Zn2+等的抑制作用极强.通过TLC对其水解产物分析发现,BUT水解壳聚糖的产物是壳二糖、壳三糖和壳四糖.

关键词：壳聚糖酶、壳聚糖、壳寡糖、克隆表达、酶学性质

所属期刊栏目：38

分类号：Q814.4(生物工程学(生物技术))

资助基金：宁波市科学技术局市级科技计划项目ZD-A02-农业重大科技专项2017C110006

在线出版日期：2019-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：147-155