理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性

摘要：

利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟.使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W.在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W.该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景.

关键词：酪氨酸酶、氢键、定点突变、热稳定性、理性设计、POPMuSiC

所属期刊栏目：36

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目31300028;国家863计划项目2015AA021004;国家973计划项目2012CB725202;江苏高校优势学科建设工程资助项目;111引智计划111-2-06;江苏省现代发酵工业协同创新中心项目

在线出版日期：2017-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：906-911