杨氏柠檬酸杆菌磷脂酶A1基因在E.coli中的表达

摘要：

为实现磷脂酶A1(PLA1)的异源表达,将杨氏柠檬酸杆菌(CICC No.21596)PLA1基因插入栽体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-pla1,并将重组质粒转入宿主菌E.coliBL21(DE3)中,获得重组菌pET28a(+)-pla1/DE3.在IPTG诱导作用下经SDS-PAGE检测,发现在重组菌发酵破碎上清液中存在33 000大小的蛋白质,与预期蛋白质大小相符.在硼砂卵黄平板上对重组菌PLA1活性进行检测,结果显示重组菌具有明显的PLA1活性,表明PLA1基因在大肠杆菌中得到了表达.经发酵初步优化,获得摇瓶发酵的最佳诱导表达条件为:转接体积分数4％、诱导时机2h、IPTG终浓度为0.4 mmol/L、37℃诱导培养8h.经酸碱滴定法测得最高酶活为(5.6±0.2) U/mL.

关键词：杨氏柠檬酸杆菌、磷脂酶A1、表达、优化、大肠杆菌

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家863计划项目2011AA100905;江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目2012-NY-002;江南大学食品科学与技术国家重点实验室自由探索项目SKLF-ZZA-201201

在线出版日期：2016-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1172-1177