人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制

摘要：

筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白.经摇瓶及5L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件.经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L.离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化.纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测.筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件.纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95％,相对分子质量为85821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符.内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求.体外生物细胞活性高达1.6×106 IU/mg.具有良好的工业应用价值.

关键词：干扰素α2b(IFNα2b)、人血清白蛋白(HSA)、毕赤酵母、质量检测、融合蛋白

所属期刊栏目：31

分类号：TS261.11(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金项目30970029

在线出版日期：2013-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1269-1274