米黑霉脂肪酶基因的高效表达及活性测定

摘要：

为了实现米黑霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)基因在大肠杆菌中的高效表达,并得到大量的具有生物活性的脂肪酶,首先通过3种方式提高RML在大肠杆菌中可溶性蛋白的表达量:1)低温诱导(16℃)RML表达；2)新型分子伴侣(Skp)与RML N端融合表达；3)载体pET32a上的Trx·tag与RML N端融合表达.其次对各蛋白质进行纯化及活性测定,各种条件得到的RML比活在(226±10～247±10) U/mg.蛋白质表达结果显示:经低温诱导RML的效果最好,纯蛋白质量浓度为0.86 mg/mL,表明诱导温度是影响可溶性蛋白质表达量的关键因素；活性测定结果表明,Skp和Trx· tag与目的基因N端的融合没有影响RML活性中心(C末端)对底物的结合和催化能力.因此,RML不仅在大肠杆菌中得到高效表达,并且保持原有生物学活性,在工业生产中有应用价值.

关键词：米黑霉脂肪酶、大肠杆菌、高效表达、活性

所属期刊栏目：31

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：国家863计划项目2010AA101502

在线出版日期：2013-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1262-1268