圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

摘要：

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带.根据PG37所产碱性脂肪酶(Lip PC) N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在3'端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT-PCR技术扩增了Lip PC成熟肽和3'非编码区的cDNA片段,并将该PCR产物直接克隆至pUCm-T载体中.序列分析表明,Lip PC含有258个氨基酸残基,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly.进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip PC完整cDNA的分析测定.最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,SDS-PAGE检测结果表明,大肠杆菌BL21所表达的GST-Lip PC融合蛋白质分子质量约为53 ku.

关键词：圆弧青霉PG37、碱性脂肪酶、克隆、表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q93-3(微生物学)

资助基金：国家科技攻关项目96-C03-02-01

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：218-223