表达新冠病毒S基因重组狂犬病病毒的构建及其免疫原性

摘要：

[背景]新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球流行已近3年,除对人类造成了巨大伤害,也影响了人类的伴侣动物.人的COVID-19疫苗已在全球应用,但动物用的新冠病毒疫苗却鲜有报道.[目的]研制兽用新冠病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)和狂犬病病毒(rabies virus,RABV)的二联苗.[方法]将合成的SARS-CoV-2 S基因和S1基因分别克隆至RABV弱毒疫苗株rHEP-Flury基因组G与L基因间,并将2个重组质粒分别与辅助质粒共转染至BHK-21细胞中,拯救重组病毒rHEP-nCOV-S和rHEP-nCOV-S1.通过RT-PCR、Western blotting和荧光抗体染色,验证重组病毒、确证S和S1蛋白在RABV中成功表达.再将重组病毒接种NA细胞及成年小白鼠,测定病毒的体外生长特性、重组病毒的致病性及免疫原性.[结果]免疫荧光结果显示,转染7d后细胞上清均出现了绿色免疫荧光,表明已成功拯救嵌合SARS-CoV-2 S和S1 基因的重组病毒RABV rHEP-nCOV-S和rHEP-nCOV-S1,并且rHEP-nCOV-S 1的增殖和扩散能力强于亲本株rHEP-Flury,但rHEP-nCOV-S与亲本株无显著差异.Western blotting结果显示,在目的位置处均出现72 kDa和144 kDa特异性条带,表明S和S1蛋白在重组RABV中高效表达.重组病毒免疫6周KM小鼠后,小鼠的体重变化与亲本RABV基本一致,重组病毒诱导小鼠产生狂犬中和抗体.[结论]本研究拯救出了嵌合SARS-CoV-2 S/S1基因的重组RABV,为动物COVID-19载体疫苗的研发奠定了基础.

关键词：新型冠状病毒、狂犬病病毒、S基因、疫苗、免疫原性

所属期刊栏目：49

分类号：R373.1;S852.65;R563.1

资助基金：国家自然科学基金;国家重点研发计划

在线出版日期：2023-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：5256-5265