肺炎克雷伯菌的芯片式数字PCR检测方法的建立

摘要：

[背景]条件致病菌肺炎克雷伯菌是医源性感染最重要的革兰氏阴性菌之一,目前对该病原菌的核酸检测方法存在费时费力、灵敏度低、准确性差等问题.[目的]建立基于芯片式数字PCR的肺炎克雷伯菌检测方法.[方法]依据肺炎克雷伯菌的16S rRNA基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过与实时荧光定量PCR的比较分析,确定了芯片式数字PCR方法的检测范围和最佳反应条件,并进行了方法特异性、灵敏性分析及临床菌株的检测.[结果]芯片式数字PCR检测灵敏度比实时荧光定量PCR提高了约1.5个数量级,最低检出限可达到3.77 copies/μL;优化后的芯片式数字PCR特异性与实时荧光定量PCR结果一致,方法的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于25％;本研究利用优化后的芯片式数字PCR方法共检测了 28株临床菌株,检测到14株为肺炎克雷伯菌,14株为其他种属,这也与实时荧光定量PCR检测结果一致.[结论]采用芯片式数字PCR技术建立了肺炎克雷伯菌核酸检测的绝对定量方法.该方法特异性好、灵敏度高、准确度高,适合肺炎克雷伯菌的核酸检测和定量分析,也为其他临床病原菌的分子检测提供了新的技术参考.

关键词：肺炎克雷伯菌、芯片式数字PCR、绝对定量、病原菌检测

所属期刊栏目：49

分类号：S858.28;TS201.3;R372

资助基金：国家重点研发计划;上海交通大学决策咨询课题

在线出版日期：2022-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共14页

页码：1200-1213