限制性内切酶Mlu I蛋白及其硒代衍生物的制备

摘要：

”背景”限制性内切酶Mlu I是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析.”目的”在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu I蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究.”方法”构建重组表达载体pET28b-Mlu I,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组MluI蛋白和硒代Mlu I蛋白.对蛋白进行质谱检测、圆二色谱检测以及酶活检测,利用坐滴法进行结晶条件的筛选.”结果”构建了重组表达载体pET28b-Mlu I并纯化获得达到结晶纯度的蛋白,通过质谱检测确定硒代Mlu I蛋白中的8个甲硫氨酸全部被取代,结合酶活测试及圆二色谱检测确定了硒代对Mlu I蛋白的活性、结构无明显影响.采用坐滴法进行初步的晶体生长研究,重组蛋白目前已在1种条件下获得针状晶体并进行初步衍射,获得分辨率在0.32 nm左右的衍射数据.”结论”Mlu I蛋白及硒代Mlu I蛋白纯化体系的构建和结晶条件的研究,可为下一步解析Mlu I三维结构、作用机制的探讨及定向改造奠定基础.

关键词：限制性内切酶;Mlu I;硒代蛋白;结晶

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资助基金：江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室开放基金;江苏省研究生科研与实践创新计划

在线出版日期：2021-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1528-1537