猪流行性腹泻病毒S2截短肽的原核表达及其线性B细胞表位区鉴定

摘要：

[背景]由猪流行性腹泻病-(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻给养猪业造成了巨大的经济损失.PEDV S蛋白可以诱导宿主产生中和抗体.[目的]原核表达PEDV CV777疫苗株S2截短肽(aa:961-1 382)并制备其多克隆抗体;鉴定表达的S2截短肽上的线性B细胞表位区.[方法]将经密码子优化的PEDV S2截短肽编码DNA (s2t)克隆至载体pET-28a中并转化Escherichia coliBL21(DE3),利用IPTG诱导S2截短肽表达.以经SDS-PAGE切胶纯化的重组S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.在E.coli BL21中GST融合表达覆盖S2截短肽序列全长、彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽.以制备的抗S2截短肽兔血清为一抗,通过Western blot(WB)筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S2截短肽上的线性B细胞表位区.[结果]重组PEDV S2截短肽的相对分子质量约为50 kD;诱导4h表达量最高,且主要形成包涵体.WB结果显示,纯化的S2截短肽能被猪抗PEDV血清识别;以纯化的S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多抗血清,ELISA法检测抗体效价位于1:25 600-1:102 400之间.免疫组化和间接免疫荧光分析均表明,制备的多抗血清可以识别Vero细胞培养的PEDV DR13弱毒株.以制备的多抗血清通过WB从52个GST融合表达的16肽中鉴定到11个阳性反应性16肽.WB分析显示,得到的阳性反应性16肽都可以被猪抗PEDV血清识别.鉴定到的阳性16肽在S2截短肽上形成4个线性B细胞表位区(aa:969-984;1 065-1 096;1 225-1 280;1 361-1 382).[结论]高效价抗PEDV S2截短肽多克隆抗体的制备和S2截短肽上线性B细胞抗原表位区的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立有效的PEDV检测方法奠定了基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒、S蛋白、多克隆抗体、线性B细胞表位

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资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500101;国家自然科学基金31402219,315725199;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2015第6-1-9号

在线出版日期：2019-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1785-1795