拉达克轮丝菌TGase在大肠杆菌中的分子改造

摘要：

[背景]谷氨酰胺转氨酶是一种能够催化酰基转移反应的酶,催化各种蛋白质分子之间或之内发生交联反应,在食品、化妆品、医药等领域具有重要的潜在价值.[目的]克隆来自拉达克轮丝菌(Streptoverticillium ladakanum) B1的谷氨酰胺转氨酶(TGase)基因并对其进行分子改造,使其在大肠杆菌中获得高效异源表达.[方法]分别克隆来自拉达克轮丝菌谷氨酰胺转氨酶的自身前导肽(pro)和除前导肽以外的成熟谷氨酰胺转氨酶(TGase)基因,以pET-22b为表达载体构建pro、TGase共表达和融合表达两种表达模式,在这两种表达模式的基础上进一步用定点突变的方法对成熟TGase N端前4个氨基酸进行改造,检测不同表达模式以及突变对酶活的影响.[结果]当采用前导肽与TGase共表达时,可以直接得到活性形式的TGase,比酶活达到37.71 U/mg.在融合表达的基础上,将TGase N端前3个氨基酸DSD突变为AAA,比酶活达到14.04 U/mg,相较于原始表达模式提高了14.05％.[结论]前导肽与TGase共表达可以直接产生活性TGase,对于融合表达模式,合适位点的突变有利于提高TGase酶活.

关键词：谷氨酰胺转氨酶、表达模式、定点突变、酶活

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资助基金：国家自然科学基金31670045;河北省自然科学基金C2016205130;河北省高等学校科学技术研究重点项目ZD2017047

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1320-1326