芽孢杆菌N1碱性蛋白酶的克隆表达及酶学性质

摘要：

[背景]蛋白酶广泛应用于制革行业中,酶法脱毛对环境污染较小,但蛋白酶对化学试剂的不稳定性及胶原降解活性限制了其工业应用.[目的]克隆芽孢杆菌(Bacillus sp.) N1基因组的碱性蛋白酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并对重组酶酶学性质及脱毛作用进行研究.[方法]利用基因组文库法克隆获得蛋白酶基因aprG,构建重组大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)pLysS/pET-28a-aprG.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达该重组酶,以福林酚显色法对其酶学性质进行研究,并将AprG作用于羊皮、兔皮和羽毛.[结果]克隆得到蛋白酶基因aprG,并实现其在大肠杆菌中的表达.重组酶AprG最适反应温度为50 °C,最适反应pH为10.0.各种金属离子对AprG活性影响较小,且AprG对表面活性剂和氧化剂、还原剂的耐受性较强.底物特异性分析表明,该酶胶原活性较低.AprG对羊皮和兔皮作用显著,且降解羽毛效果明显.[结论]蛋白酶AprG在制革行业中具有良好的应用前景.

关键词：芽孢杆菌N1、克隆、酶学表征、低胶原活性、脱毛作用

所属期刊栏目：46

资助基金：国家自然科学基金21676121

在线出版日期：2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：685-694