大黄鱼源溶藻弧菌的鉴定及其菌蜕制备

摘要：

[背景]菌蜕是诱导PhiX 174噬菌体裂解基因E(LysisE)在革兰氏阴性菌中表达后所获得无细胞内容物的细菌空壳.菌蜕生物安全性高,能以类似活菌方式诱导机体产生良好的系统和黏膜免疫应答.[目的]对分离自患溃疡病大黄鱼肝脏中的病原菌株16-3进行种属鉴定,利用温控调节表达系统控制PhiX 174噬菌体裂解基因E在该菌株中的表达来制备菌蜕,为防控鱼类溶藻弧菌感染提供有效手段.[方法]采用形态特征观察、生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析等方法对菌株16-3进行鉴定;构建温控裂解质粒pBV220-LysisE,并将其电转至溶藻弧菌菌株16-3,形成重组溶藻弧菌菌株16-3(pBV220-LysisE);将不同起始浓度的重组溶藻弧菌培养物同时进行42℃升温诱导,比较其溶菌动力曲线和裂解效率的差异;在最佳条件下制备溶藻弧菌菌株16-3菌蜕,电镜观察其形态与结构,采用倾注平板法测定冻干菌蜕中的活菌数.[结果]综合菌株16-3在形态、生理生化及16S rRNA基因系统发育等方面的特性,确定其为溶藻弧菌;构建了温控裂解质粒pBV220-LysisE和重组溶藻弧菌菌株16-3(pBV220-LysisE);溶藻弧菌菌株16-3菌蜕制备的最佳条件是选择起始浓度OD600为0.3的菌液进行诱导,诱导3h后即可收获菌蜕,其裂解效率为96.9‰,但经冻干处理后的菌蜕无活菌残留;电镜观察发现菌株16-3菌蜕保持原细胞的基本形态,但细胞表面有明显的溶菌孔道,且由于细胞内容流失而使细胞表面发生皱缩.[结论]制备出溶藻弧菌菌株16-3菌蜕,为其作为疫苗或疫苗递送载体奠定了基础.

关键词：溶藻弧菌、鉴定、温控裂解质粒、菌蜕

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资助基金：National Natural Science Foundation of China31672698;Graduate Innovation Fund of Anhui Agricultural University2017yis-15;Anhui Province University Students' Innovation Training Program AH201510364019国家自然科学基金31672698;安微农业大学研究生创新基金2017yis-15;安徽省大学生创新创业训练计划AH201510364019

在线出版日期：2018-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：129-137