柴油降解基因工程菌的构建及降解特性

摘要：

[目的]构建柴油降解基因工程菌,提高柴油降解速率,研究p450基因在柴油降解过程中的作用.[方法]将Alcanivorax borkumensis SK2的p450基因合成后,连接至烷烃响应表达载体pCom8中,构建该基因的表达载体p450-SK2/pCom8,并将其转入大肠杆菌DH5α中,通过SDS-PAGE检测该基因在大肠杆菌DH5α中的表达,并将重组质粒p450-SK2/pCom8转入柴油降解菌Acinetobacter sp.Y9中,构建基因工程菌p450-SK2/Y9,研究工程菌p450-SK2/Y9对柴油的降解特性及p450基因在构建的工程菌p450-SK2/Y9中的表达.[结果]PCR、酶切及测序结果表明重组质粒p450-SK2/pCom8构建正确.当柴油诱导浓度大于1％时,目的基因在大肠杆菌DH5α中的蛋白表达量较大,且随着诱导时间的延长而呈增加趋势.通过PCR检测构建的基因工程菌p450-SK2/Y9中的p450基因表明,工程菌构建正确,利用单菌株降解柴油时,宿主菌Y9与工程菌p450-SK2/Y9的柴油降解效率未见明显差异,但工程菌p450-SK2/Y9在构建的菌群中对柴油降解的促进效果明显.SDS-PAGE结果表明,p450基因在构建的工程菌p450-SK2/Y9中能得到准确表达,在混合菌中的表达量高于单菌株.[结论]柴油降解基因工程菌在混合菌群中对柴油降解具有促进作用,而在单菌株情况下未见促进作用,且p450基因的蛋白表达在混合菌中也高于单菌株,这对于提高柴油的降解速率及研究p450基因在柴油降解过程中的作用机理具有一定意义.

关键词：柴油、降解、基因工程菌、蛋白表达

所属期刊栏目：44

分类号：X70;S

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1271-1279