深海来源低温诱导表达载体pSW4的构建及其应用

摘要：

[目的]在深海来源穿梭载体pSW2的基础上构建低温诱导高效表达载体,为最终获得环境污染物高效降解菌提供基础和工具. [方法]通过最小化敲除实验确定载体必需基因,以绿色荧光蛋白GFP为报告基因检测载体的表达能力变化,进一步添加纯化标签、多克隆位点及替换启动子等改造获得低温诱导表达载体pSW4.[结果]敲除实验结果显示编码单链结合蛋白的基因fpsB敲除后载体的表达效率显著提高.以GFP为报告基因检测发现,pSW4的表达效率较pSW2有显著提升(4 ℃条件下提高10.7倍).以深海细菌Shewanella piezotolerans WP3为宿主菌,应用pSW4为表达载体表达深海细菌Shewanella psychrophila WP2的聚合酶亚基,检测显示其在Mg2+条件下具有切割单链DNA的核酸酶活性,而在Mg2+或Mn2+条件下具有切割双链DNA的核酸酶活性.[结论]构建了低温诱导表达载体pSW4,并证实了其适用性,有助于今后构建环境修复菌及相关的应用性研究.

关键词：低温诱导、载体构建、深海细菌、环境污染修复

所属期刊栏目：44

分类号：R39;S88

资助基金：国家自然科学基金项目No.31290232National Natural Science Foundation of China 31290232

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：983-990