亚硝基胍消除链霉菌FR-008的线性质粒

摘要：

[目的]利用亚硝基胍(NTG)消除链霉菌FR-008线性质粒以简化其基因组,获得背景清晰的菌株,作为抗生素异源生物合成的底盘细胞.[方法]NTG溶液处理链霉菌FR-008孢子悬液,从存活的诱变株中筛选砷敏感的突变株,再通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测线性质粒是否被消除;用生测实验定性检测各个线性质粒消除突变株杀念菌素合成的能力,最后通过HPLC定量比较突变株和野生型产生杀念菌素的差异.[结果]从103个诱变株中筛选到3株砷敏感的突变株(10#、59#、115#). PFGE检测发现它们均丢失了大线性质粒pSSFR1,此外,42#突变株的小线性质粒pSSFR2被消除,在此基础上,第二轮NTG诱变获得了双质粒消除的突变株.大线性质粒pSSFR1消除率约为3％,小线性质粒pSSFR2消除率约为1％.发酵结果显示:10#、115#突变株杀念菌素有效组分Ⅲ产量分别提高了40％和30％.[结论]首次发现NTG是一种有效消除链霉菌线性质粒的诱变剂,2株大线性质粒消除的突变株杀念菌素的产量得到提高.此方法可以用来消除特定链霉菌菌株中的巨型线性质粒以高效简化其基因组,因而是一种有效的抗生素遗传育种的方法.

关键词：链霉菌FR-008、质粒消除、线性质粒、亚硝基胍、脉冲场凝胶电泳、砷抗性、基因组简化

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资助基金：National Basic Research Program of China 973 Program No.2012CB721004国家重点基础研究发展规划973计划No.2012CB721004

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：141-149