基于己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶共表达的辅酶NADPH高效再生

摘要：

[目的]构建己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的大肠杆菌共表达体系,以葡萄糖为底物实现辅酶NADPH的高效再生.[方法]通过分子生物学方法,克隆己糖激酶HKgs、HKpp基因,并于Escherichia coli BL21(DE3)中表达,再将己糖激酶HKgs、HKpp分别与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶GpdPP共表达,实现NADPH的原位再生.比较两个共表达工程菌的辅酶再生效果,并针对催化活力较高的工程菌BL21 (HKgs+GpdPP)进行表达条件优化.[结果]NADPH再生活力达到856 U/L.该辅酶再生体系与醇脱氢酶AdhR联合催化,使不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯的催化活力提高至原始值的2.5倍.[结论]通过己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在大肠杆菌中的共表达,构建了一个新的NADPH高效再生体系,并用于醇脱氢酶催化的不对称还原反应.

关键词：共表达、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、NADPH、高效再生

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资助基金：Education Department Scientific Research Projects of Zhejiang Province No.Y201431455浙江省教育厅科研项目No.Y201431455

在线出版日期：2017-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2619-2626