脱氮除磷假单胞菌的筛选及定量检测

摘要：

[目的]筛选具有较强脱氮除磷能力的细菌,建立结合S1酶保护分析的分子探针技术,以分析该菌在发酵过程中的数量变化情况.[方法]采用缺磷培养基厌氧培养、富磷培养基好氧培养和硝酸盐还原产气实验进行脱氮除磷菌筛选.通过16S rRNA基因序列分析及同源性比对,结合菌株的生理生化鉴定试验,鉴定筛选株.设计相应的16S rRNA探针组,建立结合S1酶保护分析的分子探针技术.[结果]筛选的菌株被鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp.,命名为LY10.菌株LY10在富磷培养基中好氧培养24 h,总磷去除率达90.01％.在反硝化聚磷培养基中培养48 h,总氮和总磷去除率分别为84.71％和89.37％.针对假单胞菌16S rRNA基因序列设计了一组用于结合S1酶保护分析的分子探针Probe-P.sp,该探针具有很高的甄别灵敏度,能够将LY10与丛毛单胞属(Commonas)等5种细菌区分开;分子探针定量分析假单胞菌LY10,其细胞量与吸光值呈线性关系,检测的线性范围为103-106 cells/mL,线性方程为:y=-0.967 87+0.372 99x (R2=0.996 7,n=5).[结论]新筛的假单胞菌LY10的脱氮除磷能力较强,具有生物脱氮除磷的工业化应用潜质.所建立的结合S1酶保护分析的分子探针技术的特异性和灵敏度良好,有望应用于混菌体系中的假单胞菌的定性定量分析.

关键词：脱氮除磷菌、假单胞属、定量检测、S1酶保护分析、16S rRNA

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资助基金：国家863计划项目No.2012AA021302

在线出版日期：2014-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1994-2000