麻类脱胶高效菌株果胶裂解酶基因克隆与表达
[目的]克隆麻类脱胶高效菌株Dickeya sp.DCE-01的果胶裂解酶基因并进行原核表达,对表达产物进行纯化和酶学性质研究.[方法]根据该菌株全基因组序列预测的果胶裂解酶基因Q59419设计引物,PCR扩增后将该基因连接到pEASY-E1和pACYCDuet-1载体上,导入E.coli BL21(DE3)进行表达.选择酶活力高的阳性克隆子进行大量诱导表达后,采用超滤和Sephadex G-100凝胶层析两步法纯化出果胶裂解酶,研究其酶学性质.[结果]克隆到果胶裂解酶基因pel (GenBank登录号:JX964997),其序列全长1 128 bp,编码375个氨基酸.pA CY CDuet-1-pel-BL表达胞外果胶裂解酶活力最高,发酵液粗酶活达298.8 IU/mL.其最适反应温度为50℃,最适pH为9.0；保温1h,酶活稳定温度≤45℃,稳定pH为9.0-10.0.酶催化作用依赖于Ca2+,其最适作用浓度为2 mmol/L; Zn2+、Ca2+和NH4+促进酶活力,Fe3+和pb2+严重抑制酶活力；聚半乳糖醛酸钠为该酶的最适底物.[结论]从麻类脱胶高效菌株中发掘到碱性果胶裂解酶基因,其表达产物在生物质加工过程中具有重要工业化应用前景.
麻类脱胶、高效菌株、果胶裂解酶、基因克隆、酶学性质
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国家863计划项目2006AA02Z249;国家麻类产业技术体系建设专项项目CARS-19-E24
2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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