马克斯克鲁维酵母羰基还原酶基因的克隆与表达

摘要：

[目的]研究羰基还原酶基因的克隆、表达及其在不对称生物催化中的应用.[方法]对羰基还原酶氨基酸序列进行BLAST推导出核苷酸序列,设计引物,以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus) CGMCC 2.1977全基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,与载体pET-28a连接,转化大肠杆菌获得重组菌BL21 (DE3)-(pET28a-cMCR)和Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR).[结果]扩增的序列与已报道的mer序列有100％同源性,全长1 038 bp,共编码345个氨基酸.目的蛋白在Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)得到了高效表达,大小为42 kD.该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH是8,热稳定性与pH稳定性较差.Ca2+对酶活具有明显的激活作用,且浓度为0.5 mmol/L时效果最好.重组菌可还原4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯[(S)-CHBE],光学纯度为100％,转化率为81.0％.重组菌在制备度洛西汀关键中间体(S)-氮,氮-二甲基-3-羟基-(2-噻吩)-1-丙胺[(S)-DHTP]中也得到初步应用.[结论]从菌株马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus) CGMCC 2.1977中克隆获得了羰基还原酶基因,在大肠杆菌中成功表达,并可应用于不对称还原.

关键词：羰基还原酶、马克斯克鲁维酵母、不对称还原

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在线出版日期：2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1393-1402