毕赤酵母组成型表达脂肪酶及其高通量筛选方法

摘要：

[目的]获得组成型表达脂肪酶毕赤酵母,建立利用橄榄油罗丹明B平板高通量筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因的有效方法.[方法]运用PCR技术从pGAPZαA表达载体上扩增得到GAP启动子片段,插入到表达载体pPIC9K-proRCL中,构建组成型表达载体pGAPK-proRCL.在保留含有同源双交换重组序列的诱导型启动子AOXI序列的基础上,电转化后华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶基因proRCL表达盒在毕赤酵母基因组上发生双交换整合事件,从而组成型表达单拷贝的华根霉脂肪酶基因.[结果]重组菌发酵144 h后,脂肪酶最高酶活为130 U/mL.利用橄榄油罗丹明B平板高通量筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因.[结论]该方法将初筛时间从12d缩短为3d,排除了多拷贝突变株的干扰,为后续脂肪酶的定向进化及筛选奠定了基础.

关键词：橄榄油、罗丹明B、GAP、华根霉脂肪酶、组成型表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金20802027;国家863计划项目2010AA101501;国家973计划项目2011CB710800;中央高校基本科研业务费专项资金JUSRP11014

在线出版日期：2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：873-881