miR-149靶向抑制胰岛β细胞中FGF21表达对胰岛素分泌的影响及机制研究
[目的]探讨胰岛β细胞中miR-149对成纤维细胞生长因子21 (fibroblast growth factor 21,FGF21)靶向调控作用及抑制胰岛素分泌的作用机制,以期更好地了解糖尿病发病机制并为糖尿病诊断治疗提供新靶点.[方法]生物信息学预测靶向调控FGF21的miRNA;双荧光素酶报告基因检测实验验证靶向调节关系;qPCR检测大鼠胰岛素瘤细胞株(rat insulin-secreting betacell line,INS-1)胰岛β细胞中miR-149与FGF21 mRNA表达;应用酸醇提取INS-1胰岛β细胞中胰岛素,放射免疫法检测细胞内胰岛素含量;分别用5.6、16.7 mmol/L葡萄糖建立基础糖刺激胰岛素分泌模型(basal insulin secretion model,BIS)、高糖刺激胰岛素分泌模型(high glucose stimulates insulin secretion model,GSIS),放射免疫法测定各处理组胰岛素分泌量;western blotting检测INS-1胰岛β细胞中FGF21、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK的表达.[结果]MiR-149是潜在靶向调控FGF21的miRNA,其过表达可显著抑制FGF21荧光素酶活性,FGF21 3'URT中miR-149结合位点突变后荧光素酶活性恢复.过表达miR-149靶向抑制FGF21 mRNA与蛋白表达,进而降低INS-1细胞内胰岛素含量及分泌量,而外源过表达FGF21恢复了miR-149的抑制作用.MiR-149可靶向FGF21表达抑制其下游JNK、ERK信号通路活性.[结论]本研究揭示了在INS-1胰岛β细胞中,miR-149可通过直接靶向FGF21阻断其下游JNK、ERK信号通路抑制胰岛β细胞分泌胰岛素,进一步揭示了糖尿病发生发展恶化机制,为临床诊断治疗提供了新思路.
miR-149、大鼠胰岛素瘤细胞株、成纤维细胞生长因子21、胰岛素、糖尿病
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R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)
咸阳市卫生局惠民项目201504TZ09
2018-05-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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