胚胎SD大鼠神经干细胞原代培养及分化鉴定的实验研究

摘要：

[目的]建立胚胎SD大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)原代培养的方法,免疫荧光鉴定其纯度和分化潜能.[方法]取孕14d的SD大鼠,麻醉消毒后分离胎鼠大脑海马组织,研磨并胰酶消化后离心,计数后分瓶培养,倒置显微镜下观察神经干细胞生长情况.当神经球直径100～150 μm时,胰酶消化后计数传代培养.取第3代神经干细胞行巢蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度.将第3代神经干细胞消化计数后种植于预铺多聚赖氨酸的培养板中,7d后行微管相关蛋白2(microtubulin-associated protein 2,MAP2)、胶质纤维酸性蛋广1(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫荧光染色鉴定其分化潜能.[结果]显微镜下可见神经干细胞生长良好,增殖迅速,7d左右可形成直径大小为150 μm的神经球,细胞透光度好.第3代神经干细胞经免疫荧光染色证实纯度95％以卜.分化鉴定实验可见MAP2、GFAP和MBP阳性细胞.[结论]成功建立胚胎SD大鼠神经干细胞原代培养方法,细胞状态好、纯度高.神经干细胞有多样分化潜能,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,为神经系统损伤修复和退变性疾病的细胞替代治疗提供了实验基础.

关键词：神经干细胞、原代培养、免疫荧光、分化

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分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金项目81301050,81271392,81471275,81401067;天津市应用基础与前沿技术研究计划项目14JCQNJC10200;中国博士后基金项目2013M542583

在线出版日期：2016-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：337-340,封2