腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

摘要：

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达.目的:研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制.方法:构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),分别按不同感染复数(MOI)在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721.以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8 和caspase-9 的表达.结果:Ad5/F35-EGFP感染48 h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白.Ad5/F35-XAF1 感染48 h 后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解.结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1 在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关.

关键词：X连锁凋亡抑制蛋白质、腺病毒科、肝肿瘤、细胞凋亡

所属期刊栏目：14

分类号：R73;R97

资助基金：国家自然科学基金30572142

在线出版日期：2009-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：74-78