高效表达人端粒酶RNA逆转录病毒的构建及其对肝细胞增殖的影响

摘要：

背景:基因修饰供体肝细胞以提高其增殖能力是改善肝细胞移植疗效的关键,人端粒酶RNA(hTR)基因是上调端粒酶活性、促进肝细胞增殖的一个重要因素,与肝细胞增殖密切相关.目的:构建新型高效表达hTR的逆转录病毒,体外感染原代培养肝细胞,观察对大鼠肝细胞增殖的影响.方法:将hTR cDNA片段与能促进RNA表达的启动子H1连接后,插入逆转录病毒载体pLXSN基因组中,获得重组逆转录病毒载体pLXSN-H1-hTR,DH5α细菌内扩增后,与辅助包装质粒pCL-Ampho共转染包装细胞293-T后获得可表达hTR的逆转录病毒,测定滴度,感染原代培养肝细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTR在肝细胞中的表达,四甲基偶氮唑蓝比色(MTF)法观察hTR过表达对细胞增殖影响.结果:经抗生素筛选和限制性核酸内切酶酶切、测序鉴定,最终获得滴度为2×106菌落形成单位(cfu)/ml高效表达hTR的重组逆转录病毒--Re-H1-hTR;Re-H1-hTR感染组hTR表达最为明显;病毒Re-H1-hTR感染的肝细胞株Super-YL和Re-hTR感染的肝细胞株YL增殖能力均较对照组明显增强,其中肝细胞株Super-YL增殖水平较YL上调更为明显(P＜0.05).结论:利用新型表达hTR的重组逆转录病毒可将外源hTR基因导入肝细胞中,并维持高效表达,可显著提高肝细胞增殖能力,为基因修饰移植肝细胞提供新的手段.

关键词：人端粒酶RNA、逆转录病毒科、肝细胞、细胞移植、逆转录聚合酶链反应

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分类号：R3(基础医学)

资助基金：中国科学院资助项目30200122;上海市高校优秀青年教师后备人选资助项目03YQHB112

在线出版日期：2006-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：135-138