幽门螺杆菌27kDa外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定

摘要：

背景:幽门螺杆菌(H.pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌,现已被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关.而H.pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施,其研制和开发已成为目前研究的热点.目的:探索研制H pylori疫苗的新途径,对H pylori 27 kDa外膜蛋白(OMP27)进行基因克隆和特性鉴定.方法:培养和收集H pylori菌株NCTC11637,采用酚:氯仿抽提和纯化基因组DNA.分别设计引物P1和P2,并以该基因组DNA为模板,以聚合酶链反应(PCR)方法扩增OMP27基因片段.构建pQE30-OMP27重组表达载体时,pQE30质粒载体和纯化的PCR产物均用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切,再用T4 DNA连接酶将双酶切后的目的基因片段OMP27重组于pQE30的相应酶切位点之间,连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue.挑选转化克隆、提取质粒,并进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切和PCR方法鉴定,1%琼脂糖凝胶电泳观察酶切和PCR扩增结果,经测序分析确认后,筛选出插入目的基因的阳性克隆,命名为pQE30-OMP27.挑取单个含重组质粒pQE30-OMP27的工程菌(XL1-Blue)阳性克隆,进行培养和IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot进行蛋白表达和抗原性鉴定.结果:该目的基因的PCR产物全长723 bp,编码241个氨基酸残基组成的多肽(约27 kDa).SDS-PAGE和Western blot检测表明,电泳图谱上显示出1条相对分子量约27 kDa的新生蛋白带,占细菌总蛋白的5%,并能与H pylori感染小鼠血清发生特异性反应.表明重组H pylori OMP27具有良好的抗原性.结论:H pyloriOMP27有望成为新的H pylori疫苗候选分子,并可作为抗原用于H.pylori感染患者血清膜蛋白抗体的检测.

关键词：螺杆菌、幽门、疫苗、细菌外膜蛋白质类、基因表达

所属期刊栏目：7

分类号：R57(消化系及腹部疾病)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：265-269