Myostatin基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

摘要：

目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据.方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR技术扩增5'端和3'端酶切位点为BamH I和EcoR I,然后克隆至真核表达载体pVAC1-cms,得到重组质粒pVAC-Ms.质粒纯化后采用脂质体介导转染CHO细胞,瞬时转染后收集CHO细胞,利用RT-PCR技术和细胞荧光免疫技术检测Myostatin在CHO细胞中的转录和蛋白表达.结果:酶切和测序结果表明,Myostatin真核表达载体pVAC-Ms构建成功,RT-PCR和细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中Myostafin基因明显转录,蛋白明显表达.结论:实验成功构建了在真核细胞中能有效表达人Myostatin重组蛋白的真核表达载体,为运动员Myostatin蛋白表达的检测、强力药物筛选、训练监控及废用性肌肉萎缩治疗等方面的后续研究提供实验基础.

关键词：Myostatin、pVAC1-cms、CHO细胞、RT-PCR、细胞免疫荧光

所属期刊栏目：28

分类号：G804.7(体育理论)

资助基金：陕西省体育局科研课题资助项目0842

在线出版日期：2009-02-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：45-49,94