墨旱莲提取物促进小鼠骨髓来源的间充质干细胞迁移和成骨方向分化作用研究

摘要：

[目的]探究墨旱莲提取物(EHE)对小鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMMSCs)迁移和向成骨分化作用的影响.[方法]提取6周C57BL/6J雌性小鼠后肢股骨和胫骨中的BMMSCs,使用流式细胞术检测细胞表面分子表达.采用血清碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色观察BMMSCs向成骨、成脂、软骨细胞多方向的分化情况.通过细胞迁移侵袭(Transwell)实验探究EHE对BMMSCs迁移作用的影响.运用蛋白质印迹法(Western Blot)检测EHE对BMMSCs中CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响.通过ALP活性检测,ALP染色和茜素红染色的方法观察EHE对BMMSCs成骨诱导情况影响.[结果]小鼠原代BMMSCs提取分离后,细胞贴壁生长,形态呈长梭形.流式细胞术结果显示BMMSCs表面分子表达率如下:干细胞抗原1(sca-1)为86％、分化簇(CD)29为99％、CD140α为88.7％、CD90为63.7％、CD45为14％、CD34为1％.经成骨细胞诱导剂诱导,ALP染色后可见被黑染的成骨细胞,茜素红染色后可见红色矿化结节样的成骨细胞;经软骨细胞诱导剂诱导,甲苯胺蓝染色后可见被蓝染的软骨细胞;经成脂细胞诱导剂诱导,油红O染色后可见橘红色脂滴样的脂肪细胞.Transwell实验结果显示,与对照组相比,50 ng/mL基质细胞衍生因子-1(sSDF-1)、0.1μg/mL和1μg/mL EHE能显著增加BMMSCs的透膜数量(P<0.05),差异具有统计学意义.Western Blot实验结果显示,与对照组相比,0.1μg/mL EHE能促进CXCR4蛋白的表达(P<0.05),差异具有统计学意义.ALP活性检测、ALP染色和茜素红染色结果显示,与对照组相比,成骨诱导剂显著诱导BMMSCs向成骨细胞分化(P<0.05),差异具有统计学意义;与成骨诱导剂组相比,1μg/mL EHE能显著诱导BMMSCs向成骨细胞分化(P<0.05),差异具有统计学意义.[结论]EHE具有促进BMMSCs迁移和向成骨分化作用,其调控BMMSCs迁移的作用机制可能与促进CXCR4蛋白表达相关.

关键词：墨旱莲;骨髓间充质干细胞;细胞迁移;CXC趋化因子受体4;成骨分化

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金81630106

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：259-265