Rictor基因特异性RNA干扰表达载体的构建和筛选

摘要：

目的 构建针对Rictor基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人膀胱癌T24细胞,观察其对目的基因Rictor 表达的影响,为探讨沉默Rictor基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响奠定基础.方法 根据GENEBANK提供Rictor 基因系列,设计并化学合成三对Rictor-RNAi和一对阴性对照寡核苷酸序列,定向克隆入真核质粒载体pGCSIL-PUR中,构建pGCSIL-RICTOR-RNAi表达载体.各质粒载体瞬时转染到T24细胞,Western-Blot检测筛选载体.筛选出的载体稳定转染,Realtime-PCR和Western-Blot筛选干扰效果明显的稳定株.结果 重组质粒pGCSIL-RICTOR-RNAi经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,成功构建Rictor-RNAi载体.瞬时转染T24细胞,RICTOR蛋白表达明显降低.稳定转染T24细胞,Rictor基因表达在mRNA水平和蛋白水平均明显降低.结论 成功构建Rictor-RNAi表达载体,转染T24细胞后可有效抑制Rictor表达.

关键词：RNA干扰、Rictor基因、膀胱癌、影响

所属期刊栏目：10

分类号：R737.14;R394.21(肿瘤学)

在线出版日期：2012-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：670-672