重组人促红细胞生成素对肝细胞模拟缺血/再灌注损伤的保护作用

摘要：

目的 建立模拟缺血/再灌注损伤的肝细胞缺氧/复氧培养模型,从细胞水平探索重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的保护作用及分子机制.方法大鼠肝细胞BRL3A购于上海中科院细胞库,将复苏后呈指数生长的BRL3A细胞按照2000个/(100μl·孔)的密度种植于96孔板,加入H2O2(终浓度为200μmol/L)刺激细胞2 h,取2～3代培养的BRL3A细胞随机分为4组:①正常对照组;②H2O2处理组;③H2O2+10 U/ml rhEPO处理组;④H2O2+20 U/ml rhEPO处理组.将各组细胞继续培养4 h后,采用CCK-8测定细胞存活率,化学比色法检测培养上清中的天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,吖啶橙染色检测肝细胞自噬小体形成情况,Western Blot检测细胞LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ和p62表达情况,PI3K/AKT蛋白磷酸化水平.结果体外培养的BRL3A细胞经过H2O2刺激,细胞存活率明显下降,AST和ALT的释放量明显增加,且细胞中酸性自噬小体形成明显增多,LC3-Ⅱ表达增加,同时p62蛋白减少,p-p85和p-AKT表达亦减少.rhEPO处理后上述情况得到明显改善,与对照组相比,细胞存活率增加,AST和ALT释放减少,自噬小体减少,LC3-Ⅱ表达减少,且p62、p-p85和p-AKT均表达增加.结论rhEPO处理能显著减少肝细胞的模拟缺血/再灌注损伤,其机制可能与促进肝细胞PI3K/AKT蛋白磷酸化,降低自噬性细胞死亡有关.

关键词：重组人促红细胞生成素、肝细胞、氧化应激、自噬

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资助基金：国家重点研发计划资助项目2017YFC1103703;国家973计划资助项目2015CB554100

在线出版日期：2019-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：198-202