流式细胞术检测供体猪α-1,3-Gal和人源CD46的表达

摘要：

目的 检测基因修饰猪细胞表面α-1,3-半乳糖(α-Gal)抗原敲除情况和人源蛋白CD46 (hCD46)的表达情况,为异种器官移植提供可靠的供体.方法 采集500 μl野生型(wild type,WT)、α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除 (GTKO)、hCD46和GTKO/hCD46巴马小型猪血液,分离外周血单核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,PBMC).异硫氰酸荧光素标记的植物凝集素(FITC-GSIB4)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测α-Gal抗原敲除情况,异硫氰酸荧光素标记的hCD46膜辅蛋白抗体(anti-CD46-FITC)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测hCD46蛋白表达情况.结果 GTKO和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面α-Gal检测呈阴性,WT和hCD46巴马猪检测呈阳性,与测序结果一致;hCD46和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面hCD46蛋白检测呈阳性,WT和GTKO巴马猪检测呈阴性,与PCR鉴定结果一致.结论 建立了微量血液流式细胞术直观检测供体猪α-Gal抗原和人源CD46蛋白表达的方法.

关键词：α-1、3-半乳糖基转移酶、人源蛋白CD46、外周血单核细胞、流式细胞术

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资助基金：国家重点研发计划2017YFC1103702

在线出版日期：2018-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：375-379