HLA-SSO基因分型技术

摘要：

HLA-SSO基因分型采用序列特异性寡核苷酸(sequence specific oligonucleotide,SSO)引物来鉴定PCR扩增产物中的等位基因.该方法基于标记的单链PCR产物与SSO探针进行杂交,通过PCR扩增,获得单链及双链混合PCR产物,用于扩增的引物标记有生物素,因此扩增所得的PCR产物均被生物素标记.双链PCR产物经过变性解链成单链,所有单链与微珠上的SSO探针特异性结合,然后用荧光标记,之后与生物素结合,利用Luminex平台进行HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类等位基因的DNA分型.该技术可用于固体器官(肾、胰腺、心脏、肺等)移植和细胞移植前HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类的DNA分型检测,疾病关联分析,群体遗传研究分析和药物过敏研究.实验采用枸橼酸钠抗凝的患者外周血,采用特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取血液中的基因组DNA,终浓度为50 ～100 ng/μl.按照每个反应孔Master Mix: ddH20: Taq酶 :模板DNA以6:11.8:0.2:2(μl)的比例进行PCR扩增.将60℃预热的相应位点的Probe Mix与产物按照7.5:2.5(μl)加至96孔反应板中混合,于PCR仪中杂交.杂交结束后,56℃下,每孔加入85μl Dilution solution/PE-Streptavidin混合液.利用Luminex200液相芯片分析系统,通过SSO探针所获得的相关信号进行HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类等位基因的分型.本实验中采用的SSO探针在设计中包含中国常见及确认的HLA等位基因(CWD)的标识功能,因此,在CWD过滤条件下,可以达到30％以上的高分辨率结果.

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在线出版日期：2018-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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