临床胰岛制备过程

摘要：

胰腺在低温低压下原位灌注UW器官保存液后0～4℃保存,在最短的时间内转移至GMP实验室,胰腺经过消毒、修剪后插管灌入胶原酶,缓慢逐渐加压灌注直至胰腺组织充分膨胀.将灌注好的胰腺组织切成8～12块后转移至450 ml或600 ml的Ricordi消化罐中,迅速升温至37℃后机械震荡同时每分钟抽取组织,进行双硫腙染色,显微镜下观察胰岛分离情况,当胰岛与外分泌组织充分分离时,终止消化,迅速灌入4℃1640溶液,并将组织液收集至自配的缓冲溶液中.组织液离心洗涤2～3次后,依据IEQ计数(一个直径150μm的胰岛为一个胰岛当量).将消化后的胰岛置于UW液中静止30分钟以上,然后在COBE2991血细胞淘洗机上以连续密度梯度离心法纯化胰岛,根据每管中胰岛细胞的纯度将其分为高纯度、中等纯度和低纯度.离心后,进行双人计数,对胰岛大小、碎片、密度及形态进行量化评分,估算培养瓶数量,并置于5％ CO2培养箱22℃培养移植.

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在线出版日期：2018-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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