10.3969/j.issn.1672-5069.2014.05.019
Rac1对 L02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响
目的:检测 Rac1在 TGF-β1诱导的 L02细胞上皮间质转化中的作用,及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法应用不同活性的 Rac1质粒 pExRed-NLS Flag(空载体组)、pExRed-NLS Flag Rac1(野生型 Rac1组)、pExRed-NLS Flag Rac1T17N(显性负调控 Rac1组)、pExRed-NLS Flag Rac1G12V(持续活化型 Rac1组)瞬时转染L02细胞,经5 ng/ml TGF-β1处理细胞。采用免疫印迹法检测融合蛋白 Flag-Rac1表达,采用细胞免疫荧光及免疫印迹法检测 Ck8和 Vimentin 表达,采用细胞划痕实验及 Transwell 法检测细胞迁移能力。使用不同浓度的 Rac1特异性抑制剂 NSC23766处理 L02细胞,采用 CCK-8法检测细胞增殖,采用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡。结果四组质粒均成功瞬时转染到 L02细胞中;与空载体组和野生型 Rac1组比,持续活化型 Rac1转染细胞Vimentin 蛋白表达水平显著增高,CK8蛋白表达水平降低,细胞迁移能力增加;与空载体组和野生型 Rac1组比,显性负调控 Rac1转染细胞 Vimentin 蛋白表达水平降低,CK8蛋白表达水平增高,细胞迁移能力降低(P<0.05);在NSC23766处理 L02细胞后,细胞增殖被抑制,但各处理组细胞凋亡无明显差异。结论 Rac1可促进 TGF-β1诱导的 L02肝细胞株上皮间质转化和细胞增殖,但对细胞凋亡无明显影响。
L02细胞、Rac1、上皮间质转化、增殖、凋亡
R73;R28
江苏省自然科学基金资助项目BK2011094
2014-09-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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