结缔组织生长因子和金属蛋白酶组织抑制因子-1RNA干扰靶位的筛选

摘要：

目的 筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位.方法 根据大鼠CTGF 和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞(HSC),48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原(procol-α1)mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测 HSC培养上清液肝纤维化指标.结果 在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.09%与65.03%),在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.55%与62.84%);在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强(抑制率分别达76.60%与79.03%),而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强(抑制率达85.79%).结论 成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强.

关键词：肝纤维化、结缔组织生长因子、金属蛋白酶组织抑制因子-1、肝星状细胞、RNA干扰

所属期刊栏目：14

分类号：R31;R37

资助基金：四川省卫生厅科技项目09097;四川省重点学科资助项目SZD 0421

在线出版日期：2011-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：246-248,252