LncRNA GAS5通过TIMP-3启动子甲基化促进软骨胶原蛋白降解的实验研究
目的 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的关节疾病,可由内源性和表观遗传因素引起.软骨退变可恶化为OA.本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GAS5在OA中的基本机制.方法 14例正常膝关节软骨组织取自2018年7月至2020年7月因胫骨平台骨折在复旦大学附属中山医院吴淞医院行骨折内固定的患者,男8例,女6例;年龄19～40岁,平均(31±5)岁.35例OA膝关节软骨组织取自2018年7月至2020年7月在复旦大学附属中山医院吴淞医院就诊,诊断为OA且有膝关节置换手术指征的患者,男17例,女18例;年龄62～86岁,平均年龄(70±4)岁.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-3 mRNA 的表达情况.使用白细胞介素(interleukin,IL)-1β(10 ng/mL)建立OA 细胞模型,分析OA 基因芯片 GSE16464.RT-qPCR 和 western-blot检测软骨分解代谢抑制因子TIMP-3的表达.用芯片定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测TIMP-3启动子区富集的CpG岛情况.用生物信息学方法预测GAS5与TIMP-3的靶向关系,并用双荧光素酶报告基因检测法进行验证.结果 在OA患者组织中TIMP-3 mRNA表达显著低于正常软骨组织,OA患者组与正常软骨组织软骨细胞TIMP-3启动子区甲基化阳性率分别为72.1％和35.7％.LncRNAGAS5在OA中高表达,LncRNAGAS5在OA中表达较正常软骨组织中表达明显上调(P＜0.05).Blast序列比对GAS5序列与TIMP-3启动子序列具有结合位点.沉默LncRNA GAS5促进TIMP-3表达,抑制OA软骨细胞胶原降解.双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与TIMP-3具有靶向调控关系.结论 OA软骨组织中TIMP-3低表达,而LncRNA GAS5表达上调;LncRNA GAS5可富集DNA甲基化转移酶,抑制TIMP-3的表达,促进软骨细胞胶原蛋白降解.
长链非编码RNA GAS5;骨关节炎;DNA甲基化转移酶;金属蛋白酶抑制剂-3
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R684.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
上海市卫生健康委员会科研课题;上海市自然科学基金
2021-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
999-1004
