不同转染方法对逆转录病毒转染效率影响的研究

摘要：

目的 探讨不同加样方法对逆转录病毒转染软骨细胞效率的影响.方法 将构建并包装好的逆转录病毒重组基因PLNCX2-IL-1Ra-GFP分别采用以下加样转染方法进行转染并作对照研究,a)第1组:先加病毒上清,6 h后补充培养液;b)第2组:先加病毒上清,隔夜补充培养液;c)第3组:先加病毒上清,6 h后更换成培养液,隔夜培养后弃液,重复先加病毒上清,6 h后更换成培养液;d)第4组:先加病毒上清,6 h后补充培养液,隔夜培养后弃液,重复先加病毒上清,6 h后补充培养液;e)第5组:经典转染法,同时加病毒上清液和培养液.转染2 d后免疫荧光显微镜下观察荧光显色,4周稳定转染后分别检测各组细胞培养液中NO含量,并用ELISA法检测上清液中hIL-1Ra的表达情况.结果 酶切鉴定重组基因正确;免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色;1～5组NO含量以第4组为最高,第5组为最低;ELISA检测1～5组培养液中hIL-1Ra的含量以第4组为最高,第5组为最低.结论 四种不同加样转染方法的转染效率均高于经典法,其中以第4组为最好.

关键词：转染方法、逆转录病毒、转染效率

所属期刊栏目：14

分类号：R641(创伤外科学)

资助基金：国家自然科学基金项目30500515;山西省自然科学基金项目2006021045

在线出版日期：2009-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：733-735