HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

摘要：

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平.方法:设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体,酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功.重组病毒转染H1299细胞,以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率.将感染好的细胞分为干扰NC组(NEG-shRNA)、干扰组(shRNA-HSP90β)、过表达NC对照组(NEG-pEZ)及过表达组(pEZ-HSP90β).通过qRT-PCR与West-ern blotting分别从mRNA和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平.结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致.病毒包装成功后,嘌呤霉素最小致死浓度1μg/ml,感染复数200,感染人Saos-2的感染效率达80％,其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35％,pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍.进一步研究发现,shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低,pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加.结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功,并能够在Saos-2中稳定表达.

关键词：骨肉瘤细胞、HSP90β、慢病毒载体、RNA干扰、过表达

所属期刊栏目：28

分类号：R738.1(肿瘤学)

在线出版日期：2020-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1057-1062