人钙调神经磷酸酶Aα RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建人CaNAα(钙调神经磷酸酶催化亚基α异构体,calcineurin catalytic subunit alpha isoform)RNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV并鉴定.方法:根据CaNAα mRNA选择靶区、设计合成shRNAs及无关对照序列,酶切连接pGCSIL-PUR载体,经测序鉴定阳性克隆,提取质粒、转染SBC-5细胞,经real-time PCR及Western blot检测CaNAα沉默水平;选择高沉默效率的pGCSIL-PUR-shRNA3进行慢病毒颗粒包装,浓缩纯化并滴定浓度后,-80℃保存备用.结果:与对照组相比,pGCSIL-PUR-shRNA3沉默效率最高,成功包装慢病毒颗粒,滴定浓度为1×109TU/ml.结论:成功构建人CaNAα RNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV,为后续功能研究奠定基础.

关键词：RNAi、钙调神经磷酸酶Aα、慢病毒载体

所属期刊栏目：20

分类号：R730.54;R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30873028

在线出版日期：2012-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：433-437